practica 5
                                                            centrifuga
                                                            
Una centrífuga o centrifugadora es una máquina que pone en rotación una muestra para acelerar por fuerza centrífuga la decantacióno sedimentación de sus componentes o fases (generalmente una sólida y una líquida), en función de su densidad. Existen diversos tipos de estos, comúnmente para objetivos específicos.

Una aplicación típica consiste en acelerar el proceso de sedimentación, dividiendo el plasma sanguíneo y el suero sanguíneo en un proceso de análisis de sangre.

También se utiliza para determinar el hematocrito mediante una toma de muestra capilar. En este caso la máquina utilizada se denomina microcentrífuga.

Es muy usada en laboratorios de control de calidad, de fábricas que elaboran zumos a base de cítricos, para controlar el nivel de pulpa fina de estos, separando la pulpa fina del zumo exprimido.

Otra aplicación de las centrífugas es la elaboración de aceite de oliva. En ella las aceitunas una vez molidas y batidas se introducen en una centrífuga horizontal en la que se separa el aceite que es la fracción menos pesada del resto de componentes de la aceituna; agua, hueso, pulpa etc.

Una aplicación importante es la separación del uranio 235 del uranio 238.

Las centrifugadoras utilizan instrumentos llamados butirómetros para medir el grado de grasa o crema que contiene la leche, existen diferentes tipos de butirometro para crema, manteca, etc.

Los aparatos en los que se lleva a cabo la centrifugación son las centrífugas, que son dispositivos moviles con alas en las braqueas. Una centrífuga tiene dos componentes esenciales: rotor (donde se coloca la muestra a centrifugar) y motor. Existen dos tipos de rotores:

• Fijos: Los tubos se alojan con un ángulo fijo respecto al eje de giro. Se usa para volúmenes grandes.

• Basculante: Los tubos se hallan dentro de unas carcasas que cuelgan. Estas carcasas están unidas al rotor con un eje y cuando la centrífuga gira, se mueven. Se usan para volúmenes pequeños y para separar partículas con un mismo o casi igual coeficiente de sedimentación.

Las centrífugas están metidas en el interior de una cámara acorazada a unos 4ºC. Si esta cámara no estuviese presente, al comenzar la centrifugación, y debido al rozamiento con el aire, subiría la temperatura de la muestra y podría llegar a desnaturalizarse.

Una centrífuga debe tener las masas de las muestras compensadas unas con otras. En caso contrario, la centrífuga podría "saltar por los aires". Aunque hoy en día, para que esto no ocurra, casi todas las centrífugas se detienen si las masas no están compensadas.

Existen dos grandes grupos de centrífugas:

Analíticas: Con las que se obtienen datos moleculares (masa molecular, coeficiente de sedimentación, etc.). Son muy caras y escasas.

Preparativas: Con las que se aíslan y purifican las muestras. Hay 4 tipos de centrífugas preparativas:

• De mesa: Alcanzan unas 5.000 rpm (revoluciones por minuto). Se produce una sedimentación rápida. Hay un subtipo que son las microfugas que llegan a 12.000-15.000 rpm. Se obtiene el precipitado en muy poco tiempo.

• De alta capacidad: Se utilizan para centrifugar volúmenes de 4 a 6 litros. Alcanzan hasta 6.000 rpm. Son del tamaño de una lavadora y están refrigeradas.

• De alta velocidad: Tienen el mismo tamaño que las de alta capacidad y llegan a 25.000 rpm.

• Ultracentrífugas: Pueden alcanzar hasta 100.000 rpm. También están refrigeradas. Son capaces de obtener virus.
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• La centrifugación es un método por el cual se pueden separar sólidos de líquidos de diferente densidad mediante una fuerza rotativa, de una máquina llamada centrífuga, la cual imprime a la mezcla con una fuerza mayor que la de la gravedad, provocando la sedimentación de los sólidos o de las partículas de mayor densidad.
• • tipos de centrifugados:
  • Centrifugación diferencial: Se basa en la diferencia en la densidad de las moléculas. Esta diferencia debe ser grande para que sea observada al centrifugar. Las partículas que posean densidades similares sedimentarán juntas. Este método es inespecífico, por lo que se usa como centrifugación preparativa para separar componentes en la mezcla (por ejemplo, para separar mitocondrias de núcleos y membrana) pero no es útil para separar moléculas.
  • Centrifugación isopícnica: Partículas con el mismo coeficiente de sedimentación se separan al usar medios de diferente densidad. Se usa para la separación de ADN con mucha frecuencia.
  • Centrifugación zonal: Las partículas a separar se separan por la diferencia en la velocidad de sedimentación a causa de la diferencia de masa de cada una. La muestra se coloca encima de un gradiente de densidad preformado. Por la fuerza centrífuga las partículas sedimentan a distinta velocidad a traves del gradiente de densidad según su masa. Se debe tener en cuenta el tiempo de centrifugación ya que si se excede, todas las moléculas podrían sedimentar en el fondo del tubo de ensayo.
  • Ultracentrifugación: Permite estudiar las características de sedimentación de estructuras subcelulares (lisosomas, ribosomas y microsomas) y biomoléculas. Utiliza rotores (fijos o de columpio) y sistemas de monitoreo. Existen diferentes maneras de monitorear la sedimentación de las partículas en la ultracentrifugación, el más común de ellos mediante luz ultravioleta o interferones.
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  • objetivo
  • el objetivo de esta practica es el uso y funcionamiento de la centrifuga un material importante en el laboratorio.
  • conclusiones
  • la centrifuga no ayuda mucho por ejemplo cuando necesitamos realizar un observación en la sedimentacion de la orina que fue lo que realizamos en esta practica y para esto seguimos los pasos de la practica de examen general de orina
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material volumetrico

 

 MATERIAL DE USO FRECUENTE EN EL LABORATORIO

Descripción

En el laboratorio se puede encontrar material muy diverso y es importante conocer su función puesto que de su correcto uso depende la calidad de los resultados obtenidos.

El material habitualmente utilizado en el laboratorio analítico se puede clasificar en:

   1. Material para la medida de volúmenes aproximados

   2. Material volumétrico, para la medida de volúmenes con gran precisión.

   3. Otro material de uso frecuente

 Material para la medida de volúmenes aproximados

La medida de un volumen de forma aproximada se puede realizar mediantevasos de precipitados, Probetas y matraces Erlenméyer.

Vasos de precipitados

La precisión que se alcanza con ellos es bastante baja y se emplean para contener líquidos, realizar tratamiento de muestra y precipitaciones.

Los hay de distintos tamaños (50, 100, 250 y 1000 mL) y pueden ser de vidrio o de plástico.

Probetas

Permiten medir volúmenes de forma aproximada, o transvasar y recoger líquidos. Se fabrican de distintos tamaños y materiales (vidrio y plástico), siendo las capacidades más frecuentes son 5, 10, 25, 50, 100, 250, 500 y 1000 mL.

Matraces Erlenmeyer

Este tipo de matraces se emplean principalmente en las valoraciones.

Material volumétrico

Este tipo de material permite la medida precisa de volúmenes. En este grupo se incluyen buretas, pipetas graduadas, pipetas aforadas, micropipetas ymatraces aforados. En función de su calidad, existen pipetas, matraces aforados y buretas de clase A y de clase B. La clase A es de mayor calidad y es la que debe usarse en Química Analítica.

Buretas

Se emplean para la medida precisa de volúmenes variables y por lo tanto están divididas en muchas divisiones pequeñas.

Se usan principalmente en valoraciones.

El tamaño común es de 25 y 50 mL, graduados cada 0,1 mL.

 

Pipetas aforadas

Se emplean para transferir un volumen exactamente conocido de disoluciones patrón o de muestra

En la parte superior tienen un anillo grabado que se denomina línea de enrase. Si se llena la pipeta hasta dicha línea y se descarga adecuadamente se vierte el volumen que indique la pipeta.

Pipetas graduadas

Se emplean para la para la medida de un volumen variable de líquido que se vierte.

Proporcionan una exactitud inferior a la de las pipetas aforadas salvo en el caso de las de 1 y 2 mL.

Micropipetas
Transfieren volúmenes variables de unos pocos mililitros o microlitros de líquido.

Con esta pipeta se desplaza un volumen conocido y ajustable de aire de la punta desechable de plástico haciendo un uso adecuado de las mismas.

Matraces aforados
Un matraz volumétrico o aforado es un recipiente de fondo plano con forma de pera que tiene un cuello largo y delgado. La línea delgada, línea de enrase, grabada alrededor del cuello indica el volumen de líquido contenido a una temperatura definida y se denomina línea de enrase.

PRACTICA 4
                                               
                                                            HEMOGRAMA

                                                                  



                                           OBJETIVO:

Que el alumno realice el frotis  y aprenda a reconocer las diferentes células de la sangre, el objetivo también es tener informaciones sobre las células de la sangre, llamadas leucocitos, plaquetas y hematíes. Por lo tanto, en un hemograma no es posible tener datos sobre el nivel de colesterol, tasa de glucosa, investigación de bacterias, etc.

                                   INTRODUCCIÓN
El hemograma es uno de los análisis de sangre más útiles y más solicitados en la práctica médica. Algunas personas creen que todo examen de sangre es un hemograma, como si ambos términos fuesen sinónimos. Esto es una equivocación. Cuando el médico solicita una muestra de sangre, necesita indicar al laboratorio lo que él pretende que sea analizado. En nuestra sangre circulan varias sustancias que pueden ser medidas o investigadas, como proteínas, anticuerpos, células, electrolitos (potasio, sodio, calcio, magnesio, etc.), colesterol, hormonas e incluso bacterias o virus en casos de infección.
Los actuales valores de referencia del hemograma fueron establecidos en la década de 1960, después de la observación de varios individuos sin enfermedades. Lo que es considerado normal corresponde a los valores que ocurren en el 95% de la población saludable. El 5% de las personas sin problemas médicos pueden tener valores de hemograma fuera de la franja de referencia (el 2,5% un poco abajo y el otro 2,5% un poco arriba). Por lo tanto, pequeñas variaciones, para más o para menos, no necesariamente indican alguna enfermedad. Obviamente, cuanto más alejado se encuentre un resultado del valor de referencia, mayor será la posibilidad de que esto represente, verdaderamente, alguna patología.

No voy a detenerme mucho en valores específicos, ya que los laboratorios actualmente hacen esa cuenta automática a través de máquinas, y los valores de referencia siempre vienen impresos en los resultados. Cada laboratorio tiene su valor de referencia propio, y, en general, son todos muy semejantes.
ERITROGRAMA

El eritrograma es la primera parte del hemograma. Es el estudio de los glóbulos rojos, o sea, de los hematíes, también llamados de eritrocitos.

 

LEUCOGRAMA

El leucograma es la parte del hemograma que evalúa los leucocitos. Estos son también conocidos como serie blanca o glóbulos blancos. Son las células de defensa responsables por combatir agentes invasores.

Los leucocitos son, en realidad, un grupo de diferentes células, con diferentes funciones en el sistema inmunológico. Algunos leucocitos atacan directamente al invasor, otros producen anticuerpos, otros apenas hacen la identificación y así sucesivamente.

El valor normal de los leucocitos varía entre 4000 y 11000 células por ml.

Existen cinco tipos de leucocitos, cada uno con sus particularidades, a saber:

Neutrófilos 

El neutrófilo es el tipo de leucocito más común. Representan alrededor del 45% al 75% de los leucocitos circulantes. Los neutrófilos son especializados en combatir las bacterias. Cuando hay una infección bacteriana, la médula ósea aumenta su producción, haciendo que su concentración sanguínea se eleve. Por lo tanto, cuando tenemos un aumento del número de leucocitos totales, causado básicamente por la elevación de los neutrófilos, estamos probablemente frente a un cuadro infeccioso bacteriano.

Los neutrófilos tienen un tiempo de vida de aproximadamente 24-48 horas. Por eso, en cuanto el proceso infeccioso es controlado, la médula reduce la producción de nuevas células y sus niveles sanguíneos retornan rápidamente a los valores basales.

Neutrofilia = es el término usado cuando hay un aumento del número de neutrófilos.
Neutropenia = es el término usado cuando hay una reducción del número de neutrófilos.
 
Segmentados o bastones

Los segmentados o bastones son los neutrófilos jóvenes. Cuando estamos infectados, la médula ósea aumenta rápidamente la producción de leucocitos y acaba por lanzar a la corriente sanguínea neutrófilos jóvenes recién producidos. La infección debe ser controlada rápidamente, por eso no hay que esperar a que esas células maduren antes de enviarlas al combate. En una guerra, el ejército no manda sólo a sus soldados con mayor experiencia, sino también a aquellos otros que estén disponibles.

Normalmente, apenas entre el 4% al 5% de los neutrófilos circulantes son bastones. La presencia de un porcentaje mayor de células jóvenes es una señal de la posible existencia de un proceso infeccioso en curso.

En el medio médico, cuando el hemograma presenta muchos bastones, llamamos a este hallazgo de «desvío a la izquierda». Esta denominación deriva del hecho de que los laboratorios hacen el listado de los diferentes tipos de leucocitos colocando sus valores uno al lado del otro. Como los bastones suelen estar a la izquierda en la lista, cuando hay un aumento de su número se dice que hay un desvío hacia la izquierda en el hemograma. Por lo tanto si usted escucha el término «desvío a la izquierda», significa que hay un aumento de la producción de neutrófilos jóvenes.

 
Linfocitos

Los linfocitos son el segundo tipo más común de los glóbulos blancos. Representan entre el 15% al 45% de los leucocitos en la sangre.

Los linfocitos son las principales líneas de defensa contra las infecciones por virus y contra el surgimiento de tumores. Son ellos también los responsables por la producción de los anticuerpos.

Cuando tenemos un proceso viral en curso, es común que el número de linfocitos aumente, a veces sobrepasando el número de neutrófilos y tornándose el tipo de leucocito más presente en la circulación.

Los linfocitos son las células que hacen el reconocimiento de los organismos extraños, iniciando el proceso de activación del sistema inmunológico. Los linfocitos son, por ejemplo, las células que inician el proceso de rechazo en los transplantes de los órganos.

Los linfocitos también son las células atacadas por el virus VIH. Este es uno de los motivos por el cual el SIDA causa inmunodeficiencia y causa cuadros de infecciones oportunistas.

Linfocitosis = es el término usado cuando hay un aumento del número de linfocitos.

Linfopenia = es el término usado cuando hay una reducción del número de linfocitos.
 
Monocitos

Los monocitos normalmente representan del 3% al 10% de los leucocitos circulantes. Son activados tanto en procesos virales como bacterianos. Cuando un tejido está siendo invadido por algún germen, el sistema inmune encamina los monocitos hacia el lugar infectado. Este se activa, transformándose en macrófago, una célula capaz de “comer” micro-organismos invasores.

Los monocitos comúnmente se elevan en los casos de infecciones, principalmente en las más crónicas como la tuberculosis.
 
Eosinófilos

Los eosinófilos son los leucocitos responsables por el combate de parásitos y por el mecanismo de la alergia. Apenas entre del 1% y el 5% de los leucocitos circulantes son eosinófilos.

El aumento de eosinófilos ocurre en personas alérgicas, asmáticas o en casos de infección intestinal por parásitos.

Eosinofilia = es el término usado cuando hay aumento del número de eosinófilos.

Eosinopenia = es el término usado cuando hay reducción del número de eosinófilos.
 
Basófilos

Los basófilos son el tipo menos común de leucocitos en la sangre. Representan del 0% al 2% de los glóbulos blancos. Su elevación normalmente ocurre en procesos alérgicos y estados de inflamación crónica.

 

                                                                      ESQUEMAS

las fotos anteriores son los pasos que seguimos para la realización del hemograma que a continuación explicaremos:

1.-seguir los pasos para la realización de una venopuncion

2.-colocar una pequeña muestra de la sangre en un portaobjetos

3.-realizar el frotis

4.-teñir el frotis con el colorante de wright

5.-agregar al frotis una gota de aceite de inversión

6.- observar al microscopio

información de lo observado

La tinción de Wright es un tipo de tinción usada en histología para facilitar la diferenciación de los tipos de células de la sangre. Se usa principalmente para teñir frotis de sangre y punciones medulares, para ser examinadas al microscopio. En citogenética se usa para teñir cromosomas, para facilitar el diagnóstico de síndromes y enfermedades.

Lleva el nombre de James Homer Wright, su descubridor, que la obtuvo modificando la tinción de Romanowsky, en 1902.

Debido a que ayuda a distinguir fácilmente las células de la sangre se convirtió en una técnica muy usada para el conteo de los glóbulos blancos, una técnica rutinaria usada cuando hay sospecha de infecciones.

La tinción de Wright es una tinción de tipo Romanowsky.

Una tinción de Romanowsky consiste en azul de metileno y sus productos de oxidación, así como eosina Y o eosina B.

La acción combinada de estos colorantes produce el efecto Romanowsky que da una coloración púrpura a los núcleos de los leucocitos y a los gránulos neutrofílicos y da color rosado a los eritrocitos. Los componentes de este efecto son el azul B y la eosina Y.

Las propiedades de tinción de Romanowsky dependen del enlace de los colorantes a las estructuras químicas y de las interacciones del azul B y la eosina Y. Los agrupamientos de ácidos nucleicos, las proteínas de los núcleos celulares y el citoplasma inmaduro reactivo, fijan el azul B, colorante básico.

La eosina Y, colorante ácido, se fija a los agrupamientos básicos de las moléculas de hemoglobina y a las proteínas básicas.

OBSERVACIONES

En lo observado se detallo más a fondo situaciones que no se pueden ver a simple vista.y pudimos realizar gracias a esto el conteo de células y pudimos hacer la diferenciación de las mismas.

                                            conclusiones

hasta nuestro punto de vista nuestra conclucion es que un hemograma  es importante para tener informaciones sobre las células de  la sangre, pero también aprendimos que con el hemograma no es posible tener datos sobre el nivel de colesterol, tasa de glucosa, investigación de bacterias, etc.